兔热原法

通过耳缘静脉注入家兔体内，检查在规定时间里观察家兔的体温变化，反应了热原物质引起哺乳类动物的体温反应过程。兔热原检查法的优势在于可以用于检测任何注射剂，缺点是只能用于进入体内的药物，精密度和灵敏度差，试验重复性差，而且试验动物个体差异较大，需要的时间长，设备及试验费用高。

凝胶法

通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。如果目标是检查样品中是否存在内毒素时，鲎试剂检测在很大程度上取代了兔热原检查法，长期以来，鲎试剂（鲎中富含铜的蓝血）一直被用于无菌药物中内毒素的检测。鲎试剂（LAL）检测是内毒素评估的最佳成熟检测方式。其主要采用鲎的变形细胞提取物与待检测内毒素污染样品进行孵育，如果分析样品中存在内毒素，则会形成凝块。

最传统的LAL检测方法是定性的凝胶法。随后，开发了定量LAL检测方法，包括显色法和浊度法。在我国，鲎（中国鲎及圆尾鲎）被列为国家二级保护动物，意味着内毒素检测试剂原料将受到严格管控。随着鲎资源的逐渐减少和重组技术的发展，2020版药典已正式引入重组C因子法。凝胶法是原始的鲎试剂检测方法，利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关。如果做范围定性检测，可以使用凝胶法。但如果需要定量检测可能就不适合，因为凝胶法检测一般只能给出小于或大于的结果，其通过对样品进行多次稀释，将样品的EU/ml结果缩小到一个范围，一般是当作半定量的方法。

光度法测定法

光度法测定法包括浊度法和显色法。

浊度法：浊度法是利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化⽽测定内毒素含量的方法。可分为终点浊度法和动态浊度法。终点浊度法是依据反应混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度（吸光度或透光率)之间存在的量化关系来测定内毒素含量的⽅法。动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某⼀预先设定的吸光度或透光率所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

显色基质法：显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的⽅法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。终点显色法是依据反应混合物中内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的呈色团的量之间存在的量化关系来测定内毒素含量的方法。动态显色法是检测反应混合物的吸光度或透光率达到某一预先设定的检测值所需要的反应时间，或检测值增加速度的方法。